用于诊断流感病毒感染的快速分子检测、RT-PCR和其他分子检测的信息

背景

可用于检测季节性甲型和乙型流感病毒感染的分子检测包括逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和其他核酸扩增试验。这些测试可以高灵敏度和高特异性地检测呼吸道标本中的流感病毒RNA或核酸。值得注意的是，通过分子测定法检测流感病毒RNA或核酸并不一定表明检测到活病毒或正在进行的流感病毒复制。FDA批准的可用分子检测在中列出表.FDA批准或授权的RT-PCR检测和其他流感病毒分子检测。一列；一栏FDA批准和授权的流感诊断检测，包括核酸扩增检测，可用。

快速分子检测是分子流感诊断测试，可以在大约15-30分钟内检测上呼吸道标本中的季节性流感病毒RNA或核酸。一个平台使用等温核酸扩增，具有高灵敏度，并在15分钟或更短时间内产生结果。其他平台使用RT-PCR并在大约20-30分钟内产生结果。已报道的可用快速分子分析的灵敏度范围为66-100%。与其他分子诊断检测一样，如果有抗病毒治疗的临床指征(例如，并发症风险增加的患者、患有进行性或严重疾病的门诊患者、住院患者)，在流感可能性高的社区流感活动高峰期等待检测结果时，不应停止对疑似流感患者进行经验性抗病毒治疗。有关流感抗病毒治疗的更多信息，请访问抗病毒药物，卫生保健专业人员信息。

一些多重分子分析能够检测和区分甲型和乙型流感病毒感染；其他测试也可以识别特定的季节性甲型流感病毒亚型，例如A(H1N1)pdm09或A(H3N2)。FDA批准的快速分子检测可以在15-30分钟内提供结果，有些在护理点使用时可以免于CLIA认证。其他分子检测可以在45-80分钟或几个小时内提供结果，这取决于检测。一些FDA批准的多病原体分子检测可以检测季节性甲型和乙型流感病毒以及其他呼吸道病原体。

如何使用

临床决策

• 并非所有出现流感症状和体征的门诊患者都需要进行流感检测，以做出抗病毒治疗决定(参见图1, 图2)。一旦在社区或地理区域发现流感活动，就可以对症状和体征与疑似流感一致的门诊患者做出流感临床诊断，尤其是在社区流感活动高发期间。医院中有快速分子检测，可在约15-30分钟内得出结果，还有其他分子检测，可在约45-80分钟内检测出流感病毒RNA或核酸(参见表FDA批准的流感病毒RT-PCR检测和其他分子检测)。美国传染病学会(IDSA)建议使用快速流感分子检测代替快速流感诊断检测(RIDTs，用于抗原检测)对门诊患者的呼吸道标本进行流感检测。请参考IDSA流感临床实践指南有关流感测试的建议和测试结果解释的信息
• 临床医生应了解正在使用的已批准用于分子流感检测的临床标本。
• 建议对所有疑似流感的住院患者进行分子流感检测。
• 如果有治疗的临床指征，在等待流感检测结果期间，不应停止对疑似流感的门诊或住院患者进行抗病毒治疗。
• 由于在必须做出初始治疗决定时，分子流感检测的结果可能并不总是可用的，因此应尽快开始抗病毒治疗，因为最大的临床益处是在尽可能接近疾病发作时开始治疗，尤其是对于具有严重并发症高风险的住院患者和门诊患者。

住院患者的流感检测

• 无下呼吸道疾病的疑似流感住院患者应采集上呼吸道标本，通过分子流感检测进行流感检测。美国传染病学会(IDSA)建议使用RT-PCR或其他分子检测方法检测住院患者呼吸道标本中的流感病毒。咨询IDSA流感临床实践指南有关流感测试的建议和测试结果解释的信息。
• 有关流感抗病毒治疗的更多信息，请访问抗病毒药物，卫生保健专业人员信息。
• 如果上呼吸道标本的流感检测呈阴性，并且如果阳性检测会导致临床管理发生变化，则可考虑通过RT-PCR和其他分子检测对疑似流感和肺炎住院患者的下呼吸道标本进行流感检测。如果流感实验室诊断尚未确定，使用机械通气的疑似流感和呼吸衰竭住院患者可采集气管内抽吸标本，通过RT-PCR进行流感检测。如果收集支气管肺泡灌洗液用于其他诊断目的，也可以通过RT-PCR或其他流感病毒分子测定法进行检测。目前，对于下呼吸道标本，只有CDC RT-PCR检测获得FDA批准；这项检测仅在合格的公共卫生实验室进行(参见表FDA批准的流感病毒RT-PCR检测和其他分子检测)。临床医生可能会选择订购其他FDA批准的无标签检测，用于评估下呼吸道标本。FDA尚未对这些标本的检测性能进行评估；然而，这些化验在一些机构可能更容易获得。

• 诸如RT-PCR之类的分子测定法对于将流感病毒感染鉴定为公共机构(例如，疗养院、慢性护理机构和医院)中呼吸道暴发的原因特别有用。
• 一名或多名疑似流感患者的阳性结果可支持迅速实施流感暴发预防和控制措施的决定。临床医生应了解其公共卫生当局关于及时通知任何疑似或确诊的机构流感暴发的要求，以及何时应从患者身上采集呼吸道标本并送往公共卫生实验室进行流感实验室确认。
• 长期护理和急性后护理机构流感爆发管理临时指南是可用的。
• 美国传染病学会关于控制公共机构流感暴发的建议是可用的。

检测新的甲型流感病例

• 像RT-PCR这样的分子检测通过靶向保守基因区域来识别甲型和乙型流感病毒。一些检测方法检测甲型或乙型流感，但不指定亚型，这使得不可能识别新的甲型流感病毒。这些新毒株在抗原性和遗传性上不同于目前的季节性毒株，通常源于从禽类或猪类向人类的人畜共患病传播。
• 一些FDA批准的设备可以检测甲型或乙型流感病毒，并可以识别特定的甲型流感血凝素基因，确定亚型，如A(H1N1)pdm09或A(H3N2)。这些检测可以识别目前流行的毒株，也可以检测没有特定亚型的甲型流感病毒，称为“不可分型”这种不可分型可能表明新的甲型流感病毒感染，可能代表新的或不寻常的毒株。
• 临床医生和实验室人员使用能够检测所有当前流行的季节性甲型流感病毒亚型的分子检测法，例如A(H1N1)pdm09或A(H3N2)。如果发现“不可分型”结果(即未检测到亚型的甲型流感)，应立即联系其所在州或当地的公共卫生实验室进行额外检测，以确定感染是否由新型甲型流感病毒引起。
• 使用检测甲型流感病毒的分子检测法的临床医生和实验室人员，如果不能特异性识别当前流行的季节性甲型流感病毒亚型，例如A(H1N1)pdm09或A(H3N2)，并且怀疑有新型甲型流感病毒感染，应立即联系其所在州或当地的公共卫生实验室进行额外检测，以确定感染是否由新型甲型流感病毒引起。

影响分子检测结果的因素

许多因素会影响流感检测结果。患有无并发症流感的免疫功能正常的患者在4天后，上呼吸道的流感病毒脱落通常显著减少，尽管婴儿和幼儿可能在更长时间内可检测到流感病毒。患有下呼吸道疾病的患者可能会在下呼吸道中长时间复制流感病毒。患有下呼吸道疾病的免疫抑制患者和正在接受全身性皮质类固醇治疗的人也可能在下呼吸道中出现延长的流感病毒复制。与其他流感检测(例如，抗原检测–免疫荧光或快速流感诊断检测)相比，分子检测可以在更长的时间内检测流感病毒RNA(阳性结果)。尽管分子检测具有很高的灵敏度，但由于多种原因，流感患者可能会出现阴性结果，因此阴性分子检测RT-PCR结果可能并不总是排除流感的诊断。如果临床高度怀疑流行性感冒，重症患者应继续抗病毒治疗并发症风险增加同时收集额外的呼吸道标本，并进行进一步的流感检测。可能影响流感检测结果的因素有:

• 从发病到采集呼吸道标本进行检测的时间
• 理想情况下，应在无下呼吸道疾病的人群中尽可能早地收集呼吸道标本(理想情况下，在发病后4天内，此时流感病毒脱落率最高),并尽快进行检测。分子测定法检测呼吸道标本中流感病毒RNA或核酸的时间可能比其他检测方法检测流感病毒的时间更长(如发病72小时后)。
• 测试的呼吸道标本来源和标本处理。
• 通过RT-PCR和其他分子分析检测流感病毒RNA的最佳上呼吸道标本是鼻咽拭子、洗液或吸出物；其他可接受的样本是鼻腔和/或咽喉拭子。木杆拭子不应用于呼吸道标本采集，因为它可能会干扰RT-PCR和其他分子检测。临床医生应了解所用分子检测的批准临床标本，以及检测中制造商说明中推荐的检测用拭子类型。
• 与上呼吸道相比，患有下呼吸道疾病的住院患者可能具有延长的下呼吸道流感病毒复制。在患有下呼吸道疾病的患者中，如果临床上怀疑有流感，且上呼吸道标本检测呈阴性，则应采集并检测下呼吸道标本。对于疑似流感的危重患者，即使RT-PCR或其他分子检测呈阴性，也应考虑从多个部位采集额外的呼吸道标本，尤其是下呼吸道标本(气管内抽吸物或支气管肺泡灌洗——如果临床上有其他诊断目的的指征),并通过RT-PCR或其他分子检测重新检测流感病毒。在进行额外的流感检测之前，这类患者应继续接受抗病毒治疗。
• 从样本采集到测试的时间。
• 如果检验延迟或在患者住院之外的机构进行，标本应放置在符合检验规范的无菌病毒运输介质中，并冷藏，直到尽快运送到实验室进行检验。如果要进行病毒培养，应避免或尽量减少冷冻和解冻，以避免流感病毒降解。
• 应遵循制造商的说明，包括可接受的样本、处理、储存和加工，以实现最佳的测试性能。
• 应遵循制造商的说明，包括可接受的样本、搬运、储存和处理，以实现最佳测试性能。偏离推荐的程序可能会导致假阴性结果。

最好在发病4天内收集呼吸道标本，以便进行最佳流感检测，尤其是在没有下呼吸道疾病的患者中。尽快测试。分子分析可以比其他测试更长时间地检测病毒RNA，甚至在72小时之后。

患有下呼吸道疾病的住院患者可能会在下呼吸道中长时间复制流感。如果怀疑有流感，检测下呼吸道标本，上呼吸道检测呈阴性。对于重症患者，即使RT-PCR结果为阴性，也应考虑从多个部位(尤其是下呼吸道)采集额外标本，并重新检测流感。继续抗病毒治疗，同时等待进一步的结果

患有下呼吸道疾病的住院患者可能会在下呼吸道中长时间复制流感。如果怀疑有流感，并且上呼吸道标本检测呈阴性，则检测下呼吸道标本。对于重症患者，即使RT-PCR结果为阴性，也应考虑从多个部位(尤其是下呼吸道)采集额外标本，并重新检测流感。继续抗病毒治疗，同时等待进一步的结果。

解释测试结果

与使用不同方法的其他FDA批准的分析相比，RT-PCR和FDA批准的用于诊断用途的其他分子分析的灵敏度和特异性非常高。然而，即使使用RT-PCR，由于不适当或不良的临床标本采集或采集后和检测前标本处理不当，也可能出现假阴性结果。当患者不再释放可检测的流感病毒时，检测采集的标本也会出现阴性结果。假阳性结果虽然罕见，但也可能发生(例如，由于实验室污染或其他因素)。有关流感检测结果解释的信息也可在IDSA流感临床实践指南.

• 阴性结果
  • 阴性结果意味着在检测的呼吸道标本中没有流感病毒RNA或核酸的证据。对于住院患者，特别是患有下呼吸道疾病的患者，如果没有确定其他病因，并且临床上仍然怀疑流感，则应收集和检测额外的标本，并开始或继续抗病毒治疗。
• 阳性结果
  • 阳性结果表明在检测的呼吸道标本中检测到流感病毒RNA或核酸，证实了流感病毒感染，但不一定意味着存在传染性病毒或患者具有传染性。
  • 最近接受鼻内注射减毒流感病毒活疫苗(LAIV)的患者的上呼吸道标本检测结果呈阳性，可能表明检测到疫苗病毒。LAIV含有流感病毒株，其在温度低于体内温度的上呼吸道组织(如鼻腔)中进行病毒复制。由于鼻道在LAIV执政期间感染了活流感病毒疫苗株，在LAIV疫苗接种后几天内对鼻道取样可产生阳性流感检测结果。在接种疫苗后7天内可能检测到LAIV疫苗株，在极少数情况下，可能需要更长时间。
  • 流感分子检测的解释将取决于所进行的个别检测。例如，仅检测甲型流感病毒和A(H1N1)pdm09亚型的流感分子检测的阴性结果不能排除乙型流感病毒的感染。临床医生可以查阅包装插页，了解每个FDA批准的测试的详细描述以及结果可能意味着什么或可能不意味着什么。

分子检测的优点/缺点

优势:

• 快速分子分析和一些市售的分子分析可以在合理的时间段内产生结果以通知临床管理(范围从大约15-30分钟到少于1.5小时)。
• 对于检测流感病毒而言，分子流感试验比其他流感试验(例如，抗原检测试验，如快速流感诊断试验或免疫荧光试验，以及病毒培养)更加灵敏和特异。
• 因为检测流感病毒的分子流感检测的灵敏度和特异性都很高，所以假阳性或假阴性结果的可能性很低，因此，结果的解释受社区中流感活动水平的影响较小。

缺点:

• 一些RT-PCR和其他分子检测的结果可能在临床相关的时间范围内不可用，以通知临床管理决策。
• RT-PCR和其他分子流感检测可能不适用于所有门诊或急诊室环境。对于住院患者，这些检测并不总是在现场可用。
• 呼吸道标本可能需要送到公共卫生实验室或商业实验室进行RT-PCR。因此，尽管RT-PCR分析可在4-8小时内产生结果，但收到结果的实际时间可能要长得多。
• 大多数FDA批准的分子流感检测不被批准用于检测下呼吸道标本。
• RT-PCR和其他分子流感检测通常比其他流感检测更昂贵。
• 一些分子流感检测可能无法特异性识别所有目前流行的甲型流感病毒亚型。根据检测结果，一种甲型流感病毒亚型的阴性结果可能不排除感染另一种甲型流感病毒亚型。
• 一些正在使用的分子流感检测方法未经美国食品和药物管理局批准，并且尚未对所有可用的RT-PCR和分子检测方法的准确性进行评估。FDA批准的测试列表见表FDA批准的流感病毒RT-PCR检测和其他分子检测.
• 与其他RT-PCR和其他分子检测法相比，快速分子流感检测法检测流感病毒的灵敏度可能略低。

表.FDA批准或授权的RT-PCR检测和其他流感病毒分子检测

*注:此列表可能不包括所有FDA批准的用于检测呼吸道标本中流感病毒的RT-PCR检测或其他分子检测。有关通过FDA 501(k)许可或紧急使用授权获得的流感诊断测试的完整列表，请参见:https://www . FDA . gov/medical-devices/体外诊断/流感诊断测试