登革热病毒的血清学测试

IgM抗体捕获酶联免疫吸附试验(MAC-ELISA)

测试是什么？

• 登革热MAC-ELISA用于定性检测针对登革热病毒的IgM抗体。
• MAC-ELISA基于使用抗人IgM抗体在微量滴定板上捕获人IgM抗体，随后加入登革热病毒抗原。用于该试验的抗原来自四种登革热病毒血清型(DENV-1-4)的包膜蛋白。

在感染期间应该如何使用以及在什么时间使用？

• 随着免疫系统对抗感染，登革热病毒的IgM抗体在症状发作后4-5天开始可被检测到，并且在大约12周内可被可靠地检测到。
• 核酸扩增试验(NAAT)和MAC-ELISA的联合检测通常在患病的前1-7天提供诊断结果。当急性标本的两项检测结果均为阴性时，需要恢复期标本来诊断登革热病毒感染。
• IgM抗体检测对登革热病毒血清型确定没有用。

标本类型

• 血清
• 脑脊髓液

结果的解释

• 阳性IgM:单一样本中IgM检测结果呈阳性的患者被归类为推定的近期登革热病毒感染。
• 阴性IgM:
  • 在患病第0-7天IgM结果为阴性，且NAAT或NS1结果缺失或阴性的患者被视为未确认病例。对于这些病例，应在症状出现7天后采集第二份样本进行额外的血清学检测。
  • 出现症状7天后IgM结果为阴性，并且NAAT或NS1(登革热病毒抗原检测)缺失或阴性的患者被分类为近期感染阴性。
  • 配对样本中IgM结果从阴性变为阳性的患者(第一个样本在患病前7天收集，第二个样本在症状消退后收集)被归类为当前登革热感染。
• 血清转化:
  • 当对急性样本(通常在患病第一天采集)和恢复期样本(在7天后采集)进行IgM检测时，可观察到血清转化。如果测试结果从阴性变为阳性，则该患者被诊断为患有当前的登革热。两个样本的阴性结果强烈表明患者未感染登革热病毒。
  • IgG血清转化也可用于诊断登革热。但是，不建议在单个标本中进行IgG检测。这些抗体的存在可能表明以前感染过登革热病毒。
• 登革热血清学试验的交叉反应性:
  • 由于与其他黄病毒的交叉反应和可能的非特异性反应，IgM和IgG结果可能难以解释。因此，假定阳性、不确定和可疑的IgM抗体检测结果可通过蚀斑减少中和试验(PRNT)进行确认。见下文。

有效性

登革热IgM血清学检测可作为公共卫生和商业临床实验室的实验室开发检测。只有一种美国美国食品药品监督管理局批准的登革热IgM检测试剂盒可以在市场上买到。一些临床实验室提供IgG检测。疾控中心不建议对单一标本进行IgG检测来诊断急性登革热感染。

IgG测试

• 不推荐在单一标本中通过IgG ELISA进行血清学检测来诊断患者的急性登革热。
• 这些测试可以检测过去发生的登革热感染或其他黄病毒感染的抗体。

空斑减少中和试验(PRNT)和微量中和试验

这些测试是什么？

• PRNT是基于病毒和抗体相互作用的生物测定法。它导致病毒失活，使得病毒不再能够在细胞培养物中感染和复制。
• PRNT可以检测和测量受感染患者血清中针对登革热病毒和其他黄病毒的特异性中和抗体的滴度。
• PRNT用于更精确地确定IgM阳性患者的感染原因，对这些患者而言，特定的诊断具有临床或流行病学重要性(例如，排除其他黄病毒，如寨卡病毒或黄热病)。
• PRNT是一项劳动密集型和相对昂贵的测试。
• 单一的PRNT检测结果不能帮助确定感染时间。成对的急性和恢复期标本的PRNT结果可用于确认近期感染。
• 微量中和试验基于与PRNT相同的原理。
  • 该测定使用比色或荧光测量法测量受感染细胞的数量。
  • 开发这种分析是为了使用更少的试剂和测试更多的样品。

PRNT和微量中和试验应该如何使用？

• 当需要特定的血清学诊断来排除寨卡病毒或其他相关黄病毒时，可以使用PRNT和微中和试验。例如，在孕妇或临床和流行病学重要病例中。
• 这些测试用于确认登革热或寨卡病毒IgM阳性标本中的感染病毒。在某些情况下，它可以确定感染登革热病毒的血清型。
• 对于生活在登革热和寨卡病毒传播地区的居民，或多次长期暴露的旅行者，PRNT和微中和试验在区分黄病毒感染方面的效用可能较小。
• 临床医生应联系当地卫生部门，了解PRNT检测作为IgM阳性病例的确认性检测的有效性和可用性。

标本类型

• 血清
• 脑脊髓液(Cerebrospinal Fluid)

结果的解释

• 对登革热IgM阳性标本进行PRNT，显示仅针对一种登革热病毒血清型的中和抗体，将证实最近感染了该血清型。
• 从急性样本中的阴性PRNT血清转化为恢复期样本中的阳性PRNT血清，且仅具有针对一种登革热病毒血清型的抗体，将证实最近感染了该血清型。
• 近期黄病毒感染的一个指征是配对的急性和恢复期样本中PRNT滴度升高4倍，恢复期样本中存在针对多种登革热病毒血清型或其他黄病毒的抗体。
• 对单个登革热IgM阳性标本进行PRNT可能显示检测中包括的登革热、寨卡病毒和其他黄病毒的中和抗体滴度。这些结果被归类为最近的黄病毒感染。
• 根据PRNT结果，病例可能被重新归类为另一种黄病毒，如寨卡病毒。
• 急性疾病期间登革热IgM阳性样本的阴性PRNT或微中和结果可能表明没有可检测到的中和活性。在没有其他确证试验结果(PRNT、微中和试验、NS1或NAAT)的情况下，IgM阳性结果仍然是推定的。

有效性

PRNT和微量中和试验在疾控中心或疾控中心指定的实验室进行(即，通过完成疾控中心提供的能力小组独立证明有能力进行PRNT试验的实验室)。

公共卫生实验室可能会将IgM阳性标本提交给CDC进行PRNT，以确认阳性、可疑或不确定的IgM结果。在一些资源有限的国家，可能没有PRNTs和微量中和试验。