TAK-003：四价登革热疫苗的研发

1.1. 对登革热的免疫力

登革热感染的免疫反应复杂且多管齐下，感染可能发展为症状轻微但病情严重的疾病。首次及后续登革热感染会触发先天性和适应性免疫，但驱动保护性免疫反应与驱动保护性免疫反应并非总是一致[32,33]。登革热感染会诱导产生抗登革病毒中和抗体、抗登革病毒 Fc 效应抗体和抗 NS1 抗体，这些抗体有助于预防重症。此外，有效的细胞介导功能，包括记忆 B 细胞和 T 细胞反应，对于接种疫苗后预防后续有症状的登革热感染至关重要[34]。如果再次感染与首次感染血清型不同的登革热病毒，则发生重症的风险会增加，这可能至少部分归因于抗体依赖性增强（ADE）[35]；再次感染与重症以及更高的登革出血热（DHF）和登革休克综合征（DSS）发生率相关[36]。然而，第三次或后续感染后发生重症的风险较低[37,38]，这表明通过两次连续接触登革病毒可以诱导对所有 4 种登革病毒血清型的保护性免疫。

登革病毒血清型之间的疾病严重程度可能存在差异，据报道，DENV-1 和 DENV-3 与初次感染后重症风险增加相关，而 DENV-2 和 DENV-4 与二次感染后重症风险增加相关，这一发现与在泰国、秘鲁和尼加拉瓜进行的研究结果一致 [39–43]。已观察到同型登革病毒的再次感染，表明目前对登革病毒免疫的认识仍不完整 [44,45]。

5.1. 配方和给药方案的优化

考虑到对未感染者接种疫苗可能存在抗体依赖性增强（ADE）的理论风险，首批 I 期临床研究在志愿者最有可能未感染过黄病毒且不太可能再次自然感染登革病毒（DENV）的地区进行。这些地区包括美国以及哥伦比亚的高海拔地区，因为这些地区没有伊蚊媒介。这也确保了志愿者的血清学基线水平为零或较低，以便评估疫苗的免疫原性。TAK-003 的前两项临床试验（DEN-101 和 DEN-102）基于非人灵长类动物研究的数据，评估了两种剂量水平的制剂[75]。结果发现，两种剂量水平的反应原性均可接受，TAK-003 组和安慰剂组观察到的短暂性局部和全身不良事件（AE）发生率相当。随后的 I 期研究评估了给药制剂、给药方案和给药方法[75-78]。为了模拟蚊虫叮咬，这些 I 期研究评估了皮下和皮内两种给药途径[75,77,78]，但发现皮内给药的局部反应原性更高[77]。在 DEN-101 和 DEN-102 研究中，首剂后针对 DENV-2 的中和抗体免疫反应最强，其次是 DENV-1 和 DENV-3，而针对 DENV-4 的反应相对较弱[75,77]。因此，DEN-104 研究评估了三剂和四剂方案（包括在同一次就诊时分别在两侧接种两剂），试图提高针对 DENV-4 的免疫原性[79]；然而，这并未带来任何进一步的改善。 该试验还研究了一种改良配方，其中 TDV-4 病毒含量显著更高，但对 DENV-4 抗体滴度的影响甚微，而对 DENV-1 的抗体反应则有所降低。疫苗配方经过进一步优化，最终降低了疫苗配方中 TDV-2 病毒的含量；这提高了对 DENV-4 的抗体反应，并使 4 种血清型的抗体反应更加均衡，最终采用了这种配方[80]。

一项 II 期研究 (DEN-204) 研究了 TAK-003 的三种接种方案。中期结果表明，在接种第一剂疫苗 3 个月后接种第二剂，与单剂接种方案相比，可使基线血清阴性的接种者中 DENV-3 和 DENV-4 特异性血清阳性率更高 [81]。在接种第一剂疫苗 1 年后接种第二剂也具有类似的益处，但与 0 个月和 3 个月接种方案相比，其加强免疫反应更强 [82]。为了快速提高对所有 4 种 DENV 血清型的疫苗应答者比例，从而提高早期保护的概率，尤其是在未感染过登革热的人群中，间隔 3 个月接种两剂的 TAK-003 接种方案已进入 III 期研究。 3 个月的间隔被认为足够短，可以消除基线血清阴性个体在接种第一剂疫苗后未发生血清转化（即对所有血清型均发生血清转化）时的易感性差距。在基线血清阴性的受试者中，接种两剂疫苗 4 年后，两剂疫苗组的抗体滴度通常高于单剂疫苗组，但在基线血清阳性的受试者中未观察到明显差异[83]。在第 48 个月时，四价疫苗的血清阳性率分别为：两剂疫苗组 89%（95% CI，79–96），单剂疫苗组 86%（80–92），单剂加加强针疫苗组 97%（93–99），安慰剂组 60%（47–72）。如上所述，由于缺乏明确的保护性相关因素，增强抗体滴度的临床意义尚未完全理解，但其对抗体特异性或亲和力成熟的潜在影响是可能的。 目前正在 DEN-301 关键疗效试验中评估在完成基础免疫接种后 4.5 年内给予加强针的疗效（表 1 ）。此外，还在非流行地区评估加强针的疗效（DEN-303；表 1 ）。

5.2 免疫原性

TAK-003 的免疫原性在登革热流行区和非流行区开展了多项 I 期、II 期和 III 期研究进行评估。在这些研究中，疫苗免疫原性通过登革热微量中和试验（使用 TAK-003 组分的亲代毒株）测定，以针对每种血清型的中和抗体几何平均滴度 (GMT) 来评估，滴度下降 ≥ 50% (MNT ₅₀ )。每种血清型的血清阳性率也进行了评估，血清阳性定义为针对至少一种登革病毒血清型的倒数 MNT ₅₀ ≥ 10。与常用的 MNT 试验一样，该阈值对应于试验中可检测的最低水平。对所有 4 种血清型的滴度均 ≥ 10 的个体被视为血清阴性。

在初始血清阴性的试验参与者中，血清阳性率被用于衡量疫苗应答者的比例，其中四价血清阳性率则反映了对所有4种登革病毒血清型的应答。正如预期的那样，既往登革热暴露情况因国家而异，这可能反映了登革热的流行程度[84]。基线时血清阳性者通常对多种血清型呈阳性（即抗体滴度≥10）。这可能反映了交叉反应、既往感染多种血清型或血清阳性阈值的敏感性。

在 1 期研究中，免疫原性评估用于优化制剂和给药方案（见上文），结果显示，针对 DENV-2 的几何平均滴度（GMT）最高，其次是 DENV-1、DENV-3 和 DENV-4。血清转化率也呈现相同的模式，在 DEN-104 研究中，到第 120 天时，分别有 84%–100%、96%–100%、83%–100%和 33%–77%的受试者对 DENV-1、DENV-2、DENV-3 和 DENV-4 产生血清转化[85]。在 2 期 DEN-203 研究（首次在流行地区评估 TAK-003）中，到同一时间点，所有评估研究组对 DENV-1、DENV-2 和 DENV-3 的血清阳性率均>95%，对 DENV-4 的血清阳性率为 75%–100%。与 1 期研究类似，GMT 对 DENV-2 最高，其次是 DENV-1 和 DENV-3，对 DENV-4 最低 [85]。其他 2 期研究的结果也显示出类似的趋势 [80,83,86]。

在关键性 3 期临床试验 DEN-301（年龄范围 4-16 岁）中，85.3%的基线血清阴性受试者在接种第一剂疫苗后 1 个月产生了四价中和抗体，接种第二剂疫苗后 1 个月，这一比例上升至 99.5%[84]。在该亚组人群中，接种第二剂疫苗后 1 个月，DENV-2 和 DENV-3 的血清阳性率为 100%，DENV-1 为 99.5%，DENV-4 为 99.8%。在血清阳性亚组人群中，83.5%的受试者在接种疫苗前已为四价中和抗体阳性；接种第一剂疫苗后，这一比例上升至 99.1%，接种第二剂疫苗后上升至 99.8%，且所有 4 种血清型的血清阳性率相似[84]。接种疫苗后，基线血清阳性受试者的抗体滴度通常高于基线血清阴性受试者。虽然抗体滴度从峰值水平有所下降，但在完成接种 4.5 年后，TAK-003 受试者的抗体滴度仍显著高于安慰剂受试者[87]。

5.3. 疫苗病毒血症

由于 TAK-003 是一种减毒活病毒疫苗，病毒可能发生局部复制，导致部分个体出现短暂性病毒血症，但血清病毒血症并非诱导中和抗体产生的必要条件。血清病毒血症主要见于 TDV-2 疫苗病毒，病毒血症 RNA 水平为每毫升 2-4 log 基因组当量。血清病毒血症通常在接种第一剂疫苗后的第二周和第三周检测到，基线血清阴性个体的发生率高于基线血清阳性个体[83]。然而，需要注意的是，病毒血症的存在并不一定与疫苗有效性相关[88]。 DEN-301 研究中 TAK-003 对 DENV-1 的长期疗效也证实了这一点（对于基线血清阴性和血清阳性个体，针对 VCD 的 VE 为 52.3% [95% CI 42.6–60.3]，针对住院 VCD 的 VE 为 71.2% [95% CI 51.2–82.9]；图 2 显示了按基线血清状态划分的针对 VCD 和住院 VCD 的 VE），尽管未检测到 DENV-1 病毒血症 [87,89]。

5.4 探索性免疫学

临床试验的主要免疫学终点是中和抗体；然而，TAK-003 疫苗接种诱导的其他多种体液和细胞免疫反应也已得到评估。TAK-003 疫苗接种后，中和抗体反应的启动由 I 型干扰素通路的激活和免疫细胞的扩增所致[90]。疫苗接种可建立以四价血清型特异性记忆 B 细胞反应为主的抗体库，以及交叉反应性记忆反应[91]，并驱动持续的高亲和力多克隆结合抗体反应，包括四价补体结合抗体[92,93]。TAK-003 诱导的中和抗体可交叉中和多种登革病毒基因型[94]。利用嵌合病毒和血清型交叉反应抗体清除的研究表明，TAK-003 可诱导产生针对所有 4 种登革病毒血清型的型特异性和交叉反应性中和抗体 [94,95]。TAK-003 包含登革病毒 2 型的 NS 蛋白，这些蛋白是血清型特异性和交叉反应性免疫应答的靶点。TAK-003 可诱导针对登革病毒 NS 蛋白的功能性免疫应答，包括与登革病毒 1 型、3 型和 4 型的 NS1 蛋白发生交叉反应的登革病毒 2 型 NS1 特异性抗体 [66,96]。这些 NS1 特异性抗体可在体外阻断 NS1 介导的内皮细胞高通透性，这是登革出血热 (DHF) 标志性血管渗漏的起始模型 [97]。接种疫苗还能引发登革病毒特异性的多功能细胞介导免疫反应，包括激活 CD8+ 和 CD4+ T 细胞 [76,98,99]。T 细胞反应针对登革病毒蛋白质组中的表位，其中 NS1、NS3 和 NS5 具有免疫优势 [96,99]。 TAK-003 启动基因表达通路从而激活 CD8+ T 细胞的机制已被阐明 [98]。

总之，TAK-003 的组成旨在激活免疫反应的多个效应通路，这可能有助于产生保护性免疫。TDV-1、TDV-2、TDV-3 和 TDV-4 的 E 蛋白可诱导产生四价亲和力成熟的结合抗体，这些抗体具有抗病毒效应功能，包括中和抗体和补体结合抗体。DENV-2 NS1 可诱导产生功能性抗体，这些抗体可与 DENV-1、DENV-3 和 DENV-4 的 NS1 发生交叉反应。整个 TDV-2 蛋白质组可诱导产生多功能 CD4+ 和 CD8+ T 细胞，这些细胞可与其他 3 种 DENV 血清型发生交叉反应。这种广泛的免疫反应可能有助于预防 DENV 感染、清除病毒和预防重症。

中和抗体的存在或强度与登革病毒和其他黄病毒感染的频率和/或严重程度降低相关[100-102]。登革热免疫学领域正在不断发展，人们对其他登革病毒抗原（如 NS1）的免疫反应以及细胞免疫反应在降低抗体依赖性增强（ADE）风险、预防出血性疾病和清除登革病毒感染方面的作用有了更深入的了解[97,103-109]。

5.5. 功效

TAK-003 的疗效已在正在进行的关键性 III 期研究 DEN-301 中得到评估。该研究纳入了 20,000 名居住在亚洲和拉丁美洲登革热流行地区的 4 至 16 岁儿童[84,87,110-112]。研究设计在前 1.5 年采用主动监测，并在剩余时间内采用改良的主动监测，包括每周至少与受试者及其父母/监护人联系一次，以监测发热性疾病。所有受试者在基线时均接受了登革热血清学状态评估。该研究在亚洲和拉丁美洲登革热流行地区的多个国家开展，以捕捉血清型流行和临床实践方面的地域差异。

对研究主要终点的分析表明，完成两剂接种程序一年后，疫苗对病毒学确诊的登革热（VCD）的总体有效率为 80.2%（95% 置信区间 [CI]：73.3–85.3）。研究还表明疫苗起效迅速，在接种第二剂疫苗前 3 个月内，疫苗对 VCD 的估计有效率为 81.0%（95% CI：64.1–90.0）[84]。在为期 17 个月的随访期（从接种第二剂疫苗后 1 个月开始）内对次要终点的评估显示，疫苗对 VCD 的总体有效率为 73.3%（95% CI：66.5–78.8），在基线血清阳性参与者中为 76.1%（95% CI：68.5–81.9），在基线血清阳性参与者中为 66.2%（95% CI：在基线血清阴性参与者中，疫苗有效率为 49.1–77.5 [110]。一项探索性的逐年分析显示，第二年疫苗对 VCD 的保护率为 56.2%（95% CI：42.3–66.8），第三年为 44.7%（95% CI：32.5–54.7）[112]，表明疫苗效力随时间推移有所减弱。然而，第四年（第 40–51 个月）疫苗对 VCD 的保护率为 62.8%（95% CI：41.4–76.4）[87]。此外，图 2a 和 2b 分别显示了首次接种疫苗后 57 个月，按基线血清状态和登革病毒血清型划分的疫苗对 VCD 和住院 VCD、登革出血热以及 DCAC 定义的重症登革热的保护率 [87]。疫苗对 VCD 的累积保护率首次接种疫苗后 57 个月，总人群的疫苗有效率（VE）为 61.2%（95% CI：56.0–65.8），基线血清阳性参与者的 VE 为 64.2%（95% CI：58.4–69.2），基线血清阴性参与者的 VE 为 53.5%（95% CI：41.6–62.9）（图 2a ）[87]。图 2c 显示了从首次接种疫苗到首次接种后 57 个月内，按基线血清状态划分的疫苗有效率（VCD）值的累积发生率[87]。

尽管在接种疫苗后 4.5 年（最新可用数据点）观察到疫苗对 VCD 的疗效存在差异，但这主要由门诊病例驱动：对住院 VCD 的疗效仍然稳定。接种疫苗第一年（符合方案人群）对住院 VCD 的疫苗有效率（VE）为 95.4%（95% CI：88.4–98.2）[84]，接种疫苗 18 个月后为 90.4%（95% CI：82.6–94.7）[110]。首次接种疫苗后 27 个月，针对住院 VCD 的累积疫苗有效率 (VE) 为 89.2%（95% CI：82.4–93.3）（第二年 VE 为 76.1% [95% CI：50.8–88.4]）[111]；首次接种疫苗后 39 个月，累积疫苗有效率 (VE) 为 83.6%（95% CI：76.8–88.4）（第三年 VE 为 70.8% [95% CI：49.6–83.0]）[112]。在首次接种疫苗后 57 个月（即 1004 个月）的最新时间点，针对住院 VCD 的累积疫苗有效率维持在 84.1%（95% CI：77.8–88.6），其中基线血清阳性参与者的疫苗有效率为 85.9%（95% CI：78.7–90.7），基线血清阴性参与者的疫苗有效率为 79.3%（95% CI：63.5–88.2）（图 2c ）[87]。此外，第四年（第 40-51 个月）和最后 18 个月（第 40-57 个月）的疫苗有效率分别为 96.4%（95% CI：72.2–99.5）和 93.7%（95% CI：72.4–98.6）[87]。图 2d 显示了从首次接种疫苗后至 57 个月内住院 VCD 的累积发生率 [87]。目前正在评估加强剂量能否提高门诊 VCD 的疗效。

疫苗对登革热病毒感染的保护效力（VE）因血清型而异，接种疫苗后 4.5 年内，对登革病毒 1 型（DENV-1）、2 型（DENV-2）、3 型（DENV-3）和 4 型（DENV-4）的总体保护效力分别为 52.3%（95% CI：42.6–60.3）、82.8%（95% CI：77.3–86.9）、42.6%（95% CI：26.2–55.3）和 48.3%（95% CI：8.4–70.8）。这种差异在基线时未感染过登革热的个体中更为明显（图 2a ）。在基线血清阳性参与者中，接种疫苗后 4.5 年的累积疫苗效力范围为：针对 DENV-3 的 52.3%（95% CI：36.7–64.0），针对 DENV-4 的 70.6%（95% CI：39.9–85.6），针对 DENV-2 的 80.4%（95% CI：73.1–85.7）[87]。在基线血清阴性受试者中，该时期疫苗对登革病毒 1 型（DENV-1）的疫苗有效率（VE）为 45.4%（95% CI：26.1–59.7），对登革病毒 2 型（DENV-2）的疫苗有效率为 88.1%（95% CI：78.6–93.3），但对登革病毒 3 型（DENV-3）和登革病毒 4 型（DENV-4）的疫苗均未显示出疗效（分别为-15.5% [95% CI：-108.2, 35.9] 和-105.6% [95% CI：-628.7, 42.0]）[87]。虽然数据表明在基线血清阴性受试者中，该疫苗对登革病毒 3 型（DENV-3）缺乏疗效，但由于登革病毒 4 型（DENV-4）病例数较少（15 例疫苗接种后死亡病例），因此无法对该人群的疫苗有效率进行最终评估。在逐年分析中，虽然在血清型水平上观察到了不同程度的减弱趋势，但在住院 VCD 中没有发现这种趋势[87,112]。

在基线血清阴性受试者中，57 个月的随访期间，疫苗对 DENV-3 缺乏疗效，这与疫苗接种者（3714 例中有 11 例）的疫苗相关疾病（VCD）住院病例数高于安慰剂组（1832 例中有 3 例）相关，尽管病例数较少。敏感性分析表明，这主要是由于斯里兰卡某参与试验点的住院率极高所致。在该试验点，所有 DENV-3 VCD 病例均住院（即 6 例 VCD 病例全部住院），而斯里兰卡以外地区的 VCD 病例住院比例较低（30 例 VCD 病例中有 5 例住院），这解释了疫苗接种者中 11 例住院病例。斯里兰卡安慰剂组未报告 DENV-3 VCD 病例，安慰剂组 3 例住院病例均包含在斯里兰卡以外地区报告的 16 例 VCD 病例中。斯里兰卡的高住院率并非仅限于疫苗组的病例，在安慰剂组所有血清型中，长达 57 个月的随访期间均观察到高住院率，其中疫苗接种后死亡病例的住院率为 68.0%，而其他 7 个试验国家的住院率为 15.8%（范围：4.4%–39.1%）。斯里兰卡当地的实践是基于当地实验室检测结果对登革热病例进行住院监测（NS1），因此增加了数据解读的复杂性（更多详情请参见参考文献[87,112]）。总体而言，尽管疫苗疗效不佳的可能性更大，但这些复杂性使得无法得出确切的结论，需要进一步评估。

在基线血清阴性受试者中，经过 4.5 年的随访，仅报告了少量 DENV-4 病例（总共 15 例疫苗接种后死亡病例，另有 1 例安慰剂组受试者住院），这限制了我们对该血清型疫苗效力的了解，也是需要进一步监测的领域。为了减少此类问题，该试验在亚洲和拉丁美洲的 8 个登革热流行国家进行，但这凸显了由于登革热流行病学的不可预测性，尤其是在 DENV-4 这种不常见血清型的情况下，在现场试验中评估登革热疫苗所面临的实际挑战。鉴于在上市前评估血清型水平数据的挑战，我们计划根据世界卫生组织关于登革热疫苗研发的指导原则[113]，在登革热流行国家开展一项大型上市后有效性研究，并重点监测疫苗的有效性。

尽管存在这些局限性，但在基线血清阴性人群中总体上还是有益的，在 57 个月的随访期内，对 VCD 的疗效为 53.5%，对住院 VCD 的疗效为 79.3%，这主要归因于两种最常见的登革病毒血清型，即 DENV-1 和 DENV-2 [87]。

5.6 安全性

安全性数据来自 18 项 I-III 期研究中 27,573 名年龄在 1.5 至 60 岁之间的受试者，并提供了长达 48 个月的疫苗接种后监测数据。一项综合安全性数据分析基于 5 项安慰剂对照的 II 期和 III 期研究的汇总分析，这些研究共纳入 22,002 名年龄在 4 至 60 岁之间的受试者[114]。TAK-003 组受试者的局部反应性高于安慰剂组，这主要由青少年和成年受试者的短暂注射部位反应所致。全身反应性（接种后 14 天内）、非预期不良事件（接种后 28 天内）、严重不良事件和需要就医的不良事件的发生率与安慰剂组相当，其中最常见的预期全身不良事件为头痛（TAK-003 组 34%；安慰剂组 30%）。

在 DEN-301 关键疗效试验的第四年随访期（约 57 个月）中，基线血清阳性组的 4854 名安慰剂组受试者中有 17 名（0.4%）和 9663 名 TAK-003 组受试者中有 5 名（0.1%）发生重症登革热和/或登革出血热；基线血清阴性组的 1832 名安慰剂组受试者中有 2 名（0.1%）和 3714 名 TAK-003 组受试者中有 5 名（0.1%）发生重症登革热和/或登革出血热。重症登革热由病例严重程度判定委员会根据预先设定的标准进行评估，登革出血热则使用计算机算法，根据世界卫生组织 1997 年登革出血热诊断标准分析数据进行评估。TAK-003 组重症登革热或登革出血热病例发生率较低，主要归因于基线血清阳性受试者的疗效[87]。

在基线血清阴性受试者中，TAK-003 组重症和/或登革出血热 (DHF) 病例发生率为 n = 5 (0.1%)，安慰剂组为 n = 2 (0.1%)；其中大多数（7 例中的 6 例）由 DENV-3 引起，1 例由 DENV-1 引起 [87,112,114]。在 6 例 DENV-3 病例中，5 例在 TAK-003 组，1 例在安慰剂组，考虑到 2:1 的随机分组比例，提示两组病例数存在不平衡。TAK-003 组中有 2 例被归类为重症登革热。鉴于该亚组对 DENV-3 缺乏疗效，且 2:1 的随机分组比例导致疫苗组出现 36 例疫苗相关疾病 (VCD) 病例，而安慰剂组仅有 16 例，因此 TAK-003 组中出现更多重症或 DHF 病例的可能性更大。此外，斯里兰卡报告了 2 例登革出血热（DHF）病例（均非 III 级或 IV 级/重症登革热），该地区对登革热患者进行常规住院治疗，并定期进行超声检查和密切监测血小板计数，这可能导致 DHF 的检出率更高——试验中的安慰剂组也观察到了类似的模式[87,112]。尽管所有数据（即病例数极少、存在混杂因素以及在多级亚组分析中可能存在的偶然观察结果）不足以得出 TAK-003 会增加风险的结论，但鉴于其疗效不佳且住院病例、DHF 病例和重症病例的数量有所增加，因此有必要继续监测这种潜在风险。这将在上市后有效性研究中进行进一步评估。

总体而言，在关键性试验中经过 4.5 年的随访，未发现或得出与 TAK-003 相关的重大安全风险，并且在研发项目中，无论年龄、性别或基线登革热血清状态如何，4 至 60 岁受试者均表现出良好的耐受性 [114]。研发项目期间未发生与疫苗接种相关的死亡病例。

5.7 疫苗对登革热临床特征、连续发作和病毒血症的影响

在关键疗效试验 DEN-301 中，与安慰剂相比，TAK-003 对患有病毒性登革热（VCD）的受试者的临床表现和疾病严重程度有显著的改善作用。基线血清阳性受试者的改善趋势比基线血清阴性受试者更为明显[87,112]。具体而言，与安慰剂组相比，接种疫苗者中需要住院治疗的突破性病例比例显著降低。在首次接种后 57 个月的随访期间，13,380 名 TAK-003 接种者中有 5 名，6,687 名安慰剂接种者中有 13 名经历了两次 VCD 发作，再次发生 VCD 的相对风险为 0.19（95% CI，0.07–0.54）。这表明 TAK-003 除了预防接种疫苗后首次出现症状性登革热外，可能还具有额外的疗效[45]。对从第一剂接种到第二剂接种后 4.5 年内出现 VCD 的个体的血清型特异性登革热 RNA 滴度进行描述性比较，结果显示 TAK-003 组与安慰剂组的登革热病毒血症水平在数值上相似或更低；然而，数据解释存在一些局限性，例如某些组的病例数较少以及聚合酶链式反应的采样时间存在异质性 [87]。

5.8 联合用药研究

三项 3 期研究（DEN-305、DEN-314 和 DEN-308）分别评估了在非流行国家的健康成年人中同时接种 TAK-003 与黄热病 (YF-17D)、甲型肝炎和 9 价人乳头瘤病毒 (9vHPV) 疫苗的效果 [115–117]。

在黄热病研究中，与单独接种 YF-17D 疫苗相比，联合接种 TAK-003 疫苗在接种后 1 个月的黄热病血清保护率不劣于单独接种 YF-17D 疫苗[115]。同样，联合接种后，针对 DENV-2、DENV-3 和 DENV-4 的几何平均滴度(GMT)也不劣于单独接种。与序贯接种相比，联合接种后针对 DENV-1 的抗体滴度较低，但与其他 TAK-003 研究中观察到的结果相似；这一发现的临床意义尚不明确。联合接种与单独接种相比，未观察到安全性差异。

在甲型肝炎疫苗研究中，两种疫苗均未观察到联合用药对免疫原性或安全性的影响[116]。同样，9 价 HPV 疫苗与 TAK-003 联合用药对两种疫苗的免疫原性均无影响，且两种疫苗的耐受性均良好，未发现新的重要安全风险[117]。

5.9. 保护和免疫桥接的相关性

DEN-301 有效性试验的初步数据分析并未显示针对特定血清型的保护性中和抗体滴度存在明确的阈值，尽管较高的抗体滴度与较低的症状病例风险相关[112]。在登革热流行国家，成年人群往往血清阳性，而大多数临床病例发生在儿童和青少年中；这些因素限制了对血清阴性成年人群的有效性评估。然而，在基线血清阴性的非流行区成年人群（DEN-304 研究）和参与有效性研究（DEN-301）的流行区基线血清阴性儿童和青少年中，抗体滴度相似[112]。免疫桥接法在疫苗学中很常见，用于推断在未通过比较免疫反应直接评估的人群中的有效性，并且已被用于没有保护性相关指标的疫苗（例如百日咳和人乳头瘤病毒疫苗）[118,119]。中和抗体滴度的相似性支持将疗效过渡到成人人群[120]。